Citometría

El Servicio de Citometría del CIBICI, creado en 2005, tiene entre sus funciones dar soporte científico-técnico sobre citometría de flujo, desarrollar y optimizar nuevas aplicaciones así como realizar separaciones celulares.

La Citometría de flujo permite medir simultáneamente múltiples parámetros de cada una de las células o partículas (previamente marcadas con fluorocromos) dentro de una población heterogénea en suspensión a una velocidad de varios miles por segundo, permitiendo identificar diferentes subpoblaciones celulares, comportamientos fisiológicos, etc. Para ello las partículas en suspensión se hacen pasar mediante un sistema de flujo por un punto de análisis óptico consistente en una fuente de iluminación y excitación y un sistema de detectores que recogen la luz reflejada o emitida por cada una de las partículas. Los datos generados se almacenan para cada partícula individualmente y se analizan estadísticamente mediante software específico.

Permite el análisis de todo aquello para lo que se disponga de reactivos fluorescentes:

• Análisis de poblaciones celulares.
• Inmunofenotipaje con anticuerpos frente a proteínas de membrana o intracelulares
• Expresión de proteínas fluorescentes
• Apoptosis (AnexinaV, tunel..)
• Ciclo celular (tinción de DNA, incorporación de BrdU, ciclinas)
• Proliferación celular
• Análisis de microorganismos
• Análisis simultáneo de presencia de diferentes proteínas solubles en sueros, etc. por técnicas de CBA multiplex.
• Separación celular. 

Además, la citometría de flujo permite aislar las células con alta precisión en términos de pureza, recuperación y viabilidad en función de los parámetros analizados y, por lo tanto, su posterior utilización en ensayos o análisis restringidos a poblaciones celulares específicas, o su utilización con fines experimentales (diferenciación, viabilidad, etc.), clínicos (como la terapia regenerativa) o biotecnológicos.

Infraestructura

Citómetro de flujo BD FACSCanto II™

Fabricante: BD Biosciences

Características técnicas: Dispone de un láser azul Coherent® Sapphire™ de estado sólido refrigerado por aire (488 nm y 20 mW de potencia), que permite detectar cuatro colores. Un laser rojo JDS Uniphase™ HeNe (633 nm y 17 mW), para dos colores. El número total de detectores es de 8 (6 detectores de fluorescencias y dos de parámetros morfológicos). El software para adquirir muestras y analizar es FACSDiva.

Láser Azul 488 nm contiene 2 detectores para morfología celular Forward Scatter (FSC) y Side Scatter (SSC) y 2 filtros de, 530/30 (FITC); 585/42 (PE); 670 LP (Percp Cy5.5) y 780/60 nm (PE-Cy7).

Láser Rojo 633 nm contiene 2 detectores 780/60 nm (APC-Cy7) y 660/20 nm (APC).

Cell Sorter FACS ARIA IIu

Fabricante: BD Biosciences

Características técnicas: Dispone de tres líneas láser: El diodo Coherent® Sapphire™ de estado sólido azul (488 nm y 13 mW de potencia), permite detectar cinco colores y láser rojo (633 nm y 11 mW JDS Uniphase™ HeNe refrigerado por aire), para dos colores. En total, puede detectar hasta 9 parámetros de dispersión al mismo tiempo (7 detectores de fluorescencias, Forward scatter (FSC) y Side scatter (SSC)), así como purificar hasta 4 tipos diferentes de poblaciones celulares simultáneamente en base a características determinadas. La velocidad de adquisición puede llegar hasta 70000 eventos por segundo. Admite diferentes soportes tanto para la adquisición como para la separación de muestras. Utiliza el software FACSDiva para la adquisición y análisis de muestras.

Cinco detectores para el láser 488-nm (standard filters):

• 515–545 nm FITC
• 564–606 nm or 563–589 nm PE
• 600–620 nm PE-Texas Red®
• 675–715 nm or 665–685 nm PE-Cy™5 or PerCP or PI
• 750–810 nm PE-Cy™7

Dos detectores para el láser  633-nm:

• 650–670 nm APC
• 750–810 nm APC-Cy7

Citómetro de flujo Attune

Fabricante: Thermofisher

El citómetro de flujo Attune NxT es un analizador celular avanzado en el que la fluídica de enfoque acústico es la clave tanto para una alta sensibilidad como para un alto rendimiento.

Permite analizar 35.000 eventos/sec con una  velocidad electrónica máxima de 65.000 eventos/sec.

Cuenta con un autosampler que  permite el procesamiento rápido de varias muestras mediante el análisis automático de muestras de placas de 96, 384 y pocillos profundos..

Tiene dos láseres que permiten la detección de 9 parámetros

Laser Azul 488 nm :530/30 (FITC); 574/26 (PE); 695/40 (PerCP Cy5.5) y 780/60  PE-Cy7, más FSC y SSC

Laser Rojo 637 nm : 670/14 (APC); 720/30 Alexa 700 y 780/60 APC-Cy7.

Citometro de flujo Fortessa

Fabricante: BD Biosciences

Este equipo determina y cuantifica la fluorescencia de sondas fluorescentes unidas a diferentes partes tanto de células eucariotas como procariotas, orgánulos, proteínas. La fluorescencia emitida es recogida en distintos filtros acotados a una longitud de onda determinada. La cuantificación de la fluorescencia está asociada con el parámetro celular que se está midiendo, generando resultados cuantitativos como la intensidad de fluorescencia, porcentaje de poblaciones celulares, contaje del número de células/ML.

Este equipo es capaz de determinar hasta 18 parámetros simultáneamente, incluidos tamaño y complejidad de las células. Posee 18 detectores distribuídos para ser excitados en cuatro canales (4 Láseres).

Descripción: Citómetro de flujo analizador. El equipo consta de 4 láseres.  La configuración de láseres y filtros es la siguiente:

Láser Azul 488 nm contiene 2 detectores para morfología celular Forward Scatter (FSC) y Side Scatter (SSC) y 2 filtros de, 530/30 (FITC)  y 670/30  (PerCP Cy5.5) para fluorescencia

Láser Violeta 405 nm contiene 6 detectores 780/60 nm (BV 786); 710/50 nm ( BV711); 670/30 nm (BV650); 610/20 nm (BV605)); 525/50 nm (BV510)  y 450/20 (BV421).

Láser Rojo 640 nm contiene 3 detectores 780/60 nm (APC-Cy7); 730/45nm ( Alexa 700) y 670/30 nm (APC).

Láser Amarillo/Verde 561nm contiene 5 detectores 780/60nm (PE-Cy7) ; 710/50nm (PE-Cy5.5); 670/30nm (PE-Cy5);  610/20 nm (PE-Texas Red) y 586/15 (PE).